动物代谢成像(SPECT/PET)放射性同位素标记实验/18f/99mtc/125l/68Ga放射性标记
动物代谢成像(SPECT/PET)放射性同位素标记实验/18f/99mtc/125l/68Ga放射性标记
动物代谢成像(SPECT/PET)放射性同位素标记实验/18f/99mtc/125l/68Ga放射性标记
实验过程
选择放射性同位素的剂量
同位素必须能够承受稀释过程,并确保后续样品的放射性水平不低于背景值。由于放射性同位素在生物体内的分布并非均匀,可能会在某些器官、组织、细胞或分子中出现选择性蓄积现象。蓄积部分的放射性强度较强,在这种情况下建议以相关部位的标记物蓄积率来确定标记剂的使用量。对于细胞培养、切片处理后进行保温以及酶促反应等标记实验而言,在考虑实验目标、反应时间及处理体积的基础上确定标记剂用量较为合理。通常情况下,这种情况下选用的放射性同位素剂量应小于1微居里或几个微居里范围之内。为了防止辐射效应对实验结果造成影响,在选择和使用放射性核素时应严格控制其使用量不超过最大允许剂量(maximun permissible dose),以避免因剂量过高导致的辐射效应干扰并带来较大的误差风险
选择标记剂给入途径
在进行整体标记实验时
放射性生物样品的制备
为实现实验目标并依据标记剂所携带放射性同位素的特性来制备具有放射性的生物样品。其中放射性同位素的特性是决定生物样品制备形式的关键因素。若采用释放γ射线(γ射线)的标记剂,则样品制备较为简便;即只需定量化取被测物并将其注入井型NaI(TL)晶体管内即可完成测量操作。若采用发射硬β射线(硬β射线)标记物,则需将生物样品制成厚度较薄且呈液态的形式;或者可将液体样本铺展后进行烘干处理;此外亦可采取灰化后再铺样并放入塑料晶体闪烁仪内进行测量;或者通过置物于钟罩型盖革计数管中进行探测等方法均可达到预期效果。无论采用何种测量手段均需对样本进行定量采集工作;对于某些呈放射性分散状态的样本则应采取适当的方法对其进行浓集处理;例如测定组织内蛋白质时应先对该蛋白质进行提取分离然后再按照相应的步骤配制相应的测量样本;而对于一些采用灰化法的情况则需要注意灰化过程是否适合于那些具有易挥发特性的同位素或组织样本
放射性样品的测量
该测试方法将被划分为绝对测定与相对测定两类方式。其中绝对测定是通过测
量样品中标记同位素的真实发射速率来实现的,并且在进行绝对测定时必须对测
量结果受某些因素影响的问题加以修正这些修正因素主要包括探测器与放
射源间的空间几何关系探测器对射线接受并记录的概率反散射现象的影响以
及放射源内部自吸收的影响等各项因素都需要加以考虑。
而相对测定仅在固定探测装置上进行并未追求实际发射速率而是侧重于比
较样本之间的差异程度通常采用的是相对测定方法以反映样本间的差异特征。
几何条件在放射性测量中具有显著的影响作用。两个具有相同放射性强度的样品若放置位置不同或因制备过程导致的几何条件差异,在测定时计数值会产生较大差异,尤其是在样品与探测器之间的距离较近时这种差异更为明显。而当样品与探测器之间的距离相对较远时由于形成的相对立体角减小两者计数率的变化也会随之减小。在采用滤纸法测定3H标记物的放射性强度时需要注意滤纸在闪烁瓶中的放置位置应保持一致若使用圆形滤纸作为支撑物则其直径应尽量与闪烁瓶底部直径相等以确保滤纸位置固定
减小几何条件对放射性测量的影响可以从三方面入手:
⑴选择探测窗大的探测器,如光电倍增管作探头的探测器;
在制备样品时特别注意将其制成点状源;进而导致的是由于探测窗距离近所造成的水平位移的影响基本可忽略不计。
无论样品离探测窗远近(无论其位置如何),样本必须位于探测窗的正轴线上以减小样本相对于探测窗口的空间角。
放射性去污染和放射性废物处理
无论是在单次实验中还是在阶段性的阶段结束后(不论是哪一环节),都可能存在不同程度的放射性污染现象以及相应的放射性废弃物产生情况。因此,在完成整个实验周期后必须实施去污处理,并妥善处理所有的放射性废弃物。若有必要,则应在实验运行过程中及时采取除污措施并完成废弃物清理工作
相关应用
在生物化学及分子生物学领域中,放射性同位素标记法应用极为广泛,它不仅为揭示体内及细胞内理化过程的秘密,而且还为阐明生命活动的物质基础提供了重要研究手段.近年来,基于这一基础,放射性同位素标记技术取得了诸多重要进展,包括双重或多重放射性标记技术、稳定性同位素标记技术、活化分析方法以及与电子显微镜结合的技术等.这些技术创新不仅推动了生物化学研究从定性的静态分析向定量的动态研究跨越,而且深入阐明了一系列关键问题,如遗传密码机制、细胞膜受体特性以及RNA-DNA逆转录过程等.通过这些突破性进展,人类对生命基本现象的认识不仅形成了新的理论框架,而且开创了一条更为深入的研究路径.下面将重点介绍该技术在生物化学及分子生物学领域的几个主要应用场景.
物质代谢的研究
在体内的各种物质之间转换机制尚待深入探究。探讨它们之间的转化关系可以通过引入适当的同位素标记物来进行追踪分析,在追踪这些物质中所含有的同位素变化情况后即可揭示其相互转化规律,并可明确区分前体物质与产物之间的关系。通过确定这种标记剂存在于分子结构的具体原子位置,则可进一步推断出各物质间的转换途径及详细步骤。针对胆固醇生物合成及其代谢过程的研究中采用前体追踪法能够清晰展示其生成途径及其具体步骤,在这一过程中我们发现:只要某种化合物能在体内转化为乙酰辅酶A即可被视为生成胆固醇的关键原料,并由此可知从乙酸到胆固醇总共经历了至少36个生物合成反应步骤,在鲨烯与胆固醇之间共有二十个中间转化环节。基于此我们可将整个生物合成过程简化为:乙酸→甲基二羟戊酸→胆固醇等环节;而对于肝脏胆固醇来源的研究则表明:当使用放射性H3-胆固醇作为静脉注射标记物时放射性元素主要集中在肝脏内并通过粪便排出其特征性分布模式显示甲状腺激素的作用能够加速这一转运过程从而揭示肝脏作为血浆胆固醇主要代谢器官的作用机制;同时实验结果也表明甲状腺激素通过加速血液中的胆固醇向肝脏转运来降低其在血液中的浓度水平
物质转化的研究
物质间的相互转化规律是生命活动的关键内容,在过去的酶学研究中主要依赖离体方法。然而这些方法的效果未必能全面反映整体情况。应用同位素标记技术使研究周期大幅减少,并能在离体状态下的整体系统中实施操作。该技术不仅简化了流程还能显著提高测定灵敏度,并可同时实现定性和定量分析功能。在研究核糖苷酸向脱氧核糖核苷酸转化时采用了双标记法对产物进行了双重追踪测量或通过化学分离分别测定其放射性特征。具体而言将鸟嘌呤核苷酸(GMP)的碱基与五碳糖均标记以14C并置于离体系统中参与脱氧鸟嘌呤核苷酸(dGMP)的形成过程随后将原始标记物与产物(含有双重标记物掺入的dGMP)分别经过酸水解与层析分离处理并测定各组样本的放射性特征结果表明两组样本的放射性特征比值基本一致从而证明了产物dGMP中的五碳糖来源于原始GMP而并非其他来源否则产物中的碱基与五碳糖的比例必然与其原始来源存在显著差异这一实验结果验证了在碱基与五碳糖不分隔的情况下脱氧作用得以进行并揭示了脱氧核糖核苷酸系由直接转化而来的结论这表明脱氧过程并非经由先分解成单独的部分后再重新组装而成无细胞系统的标记实验可分析物质在细胞内的转化条件例如采用3H-dTTP作为前驱物掺入DNA后通过测定产物DNA的存在来判断新合成过程的发生
动态平衡的研究
揭示生物体内的物质处于持续更新的动态平衡状态这一特性是放射性同位素标记法对生命科学领域的重要贡献之一
生物样品中微量物质的分析
在放射性同位素标记技术尚未被广泛应用于实验研究之前,在制备样品的过程中由于样品丢失而导致回收率较低且检测灵敏度不高这一问题的影响下,“对于那些对人体机能起着重要作用但含量极低的物质来说,在没有放射性同位素标记的情况下难以实现精确测定”。近年来迅速发展的放射免疫分析技术(Radioimmunoassay)作为一种高度敏感且精确度极高的检测手段,在生命科学研究中得到了越来越广泛的应用。该方法能够检测出超过300种不同的生物分子,并以激素类化合物为主导的研究方向尤为突出;此外还包括多肽类激素、非肽类激素、蛋白质物质、环核苷酸、酶以及肿瘤相关抗原等多种类型的分子成分;同时还可以用于检测病原体和微量药物等其他相关物质
较近邻序列分析法
放射性同位素标记技术是一种重要的分子生物学研究手段,在蛋白质生物合成研究方面发挥了重要作用,在DNA复制、RNA转录以及蛋白质翻译等多个方面均有所体现。较近邻序列分析法利用同位素标记技术结合酶切理论和统计学理论对DNA分子碱基排列规律进行了证明:在体外合成DNA的过程中将其分为四批分别使用不同种类的32P标记脱氧核苷三磷酸,在充分处理后使用特定酶将5'-P转移到相邻核苷酸中。经充分处理后发现该方法能够建立DNA复制与RNA转录之间的分子生物学基础并发展出分子杂交技术:利用噬体T2-DNA制备带有放射性标记的[32P]RNA并通过密度梯度离心或微孔膜分离出具有放射性的DNA-[32P]RNA复合体并测定其放射性强度:只有能够与该复合物形成作用关系的菌体T2-DNA被检测到
表明RNA与DNA模板之间存在特殊的碱基配对互补关系;通过分子杂交技术证实了RNA逆转录为DNA的过程。此外, 放射性同位素标记技术在分子生物学研究中发挥着重要作用。
⑴对蛋白质合成过程中三个连续阶段,即肽链的起始、延伸和终止的研究;
⑵核酸的分离和纯化;
⑶核酸末端核苷酸分析,序列测定;
⑷核酸结构与功能的关系;
⑸研究RNA分子中遗传信息通过核苷酸序列传递至蛋氨酸中氨基酸结构的研究等等。为了更好地将放射性同位素标记技术应用于相关领域研究工作之中,则主要依赖于所使用的标记剂质量上乘以及核探测器灵敏度极高的前提条件之外,在方法论层面更为关键的是基于科学理论提出的创新性假说,并且结合创造性实验方案以及融合多种新兴技术手段等多方面综合考量与实施。
68Ga放射同位素标记缬氨酸
68Ga放射同位素标记色氨酸
68Ga放射同位素标记精氨酸
68Ga放射同位素标记鸟氨酸
68Ga放射同位素标记天冬氨酸
68Ga放射同位素标记络氨酸
68Ga放射同位素标记甘氨酸
68Ga放射同位素标记丝氨酸
SPECT/PET-ECT辐射断层成像
动物代谢SPECT/PET放射性同位素标记实验
注射标记有放射性药物的代谢物质进行成像
放射性同位素标记药物
放射性同位素标记与示踪
小动物影像和核素标记技术
显影成像标记定制服务
氚和其它放射性同位素标记
放射免疫分析技术
放射性同位素标记服务
放射性同位素标记蛋白
同位素外包实验
放射性核素标记和临床前药代动力学
放射性HPLC
小动物活体成像系统
蛋白类药物的同位素标记
临床前药代动力学
18F/氟-18标记生物蛋白与多肽
99mTc/锝99m放射性药物
125I标记抗体
68Ga标记显像剂
Fluorine-18
18f氟-18
99mtc:锝99m
125l放射性同位素标记服务
68Ga放射性同位素标记服务
放射性标记临床前药代动力学
蛋白药物放射性同位素标记
小动物活体成像系统服务
放射性核素标记
放射同位素外包实验
放射性同位素标记小分子化合物
放射性同位素标记抗体服务
放射性同位素标记纳米粒子
氨基酸类肿瘤显像剂氟-18标记
氟-18标记多巴胺DDSUB4/SUB受体显像剂
葡萄糖示踪剂氟18同位素
18F标记氟乙基胆碱
FECh/18F-FECh
wyf 04.14
